產品介紹:

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品名:革蘭氏染色液試劑盒

試劑盒組成:

1.結晶紫染色液:5ml×1支

2.碘液:5ml×1支

3.脫色液:5ml×2支

4.沙黃復染液:5ml×1支

原理:

通過結晶紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯致密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差,在遇脫色劑后,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色后仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

操作方法:

1.準備好革蘭氏染色所需試劑、玻片、吸水紙、鑷子、接種環、廢液缸、洗瓶、去離子水、酒精燈等,待檢測的菌株一般應為新鮮培養物;

2.以酒精擦拭玻片,在酒精燈上干燥后,用接種環挑取一環滅菌的去離子水或生理鹽水到載玻片上,挑取少量純培養物在水滴上涂抹至均勻分散,將涂片在酒精燈火焰上滅活、固定;

3.加結晶紫溶液1-2滴,染色1分鐘,用去離子水輕輕從培養物上方流過水洗;

4.待干,加革蘭氏碘液,作用1分鐘,用去離子水輕輕從培養物上方流過水洗;

5.加脫色液(95%酒精),不時搖動玻片,直至無紫色脫落為止(約10-20秒),用去離子水輕輕從培養物上方流過水洗;

6.待干,加復染液,復染30秒。用去離子水輕輕從培養物上方流過水洗,待玻片干燥后鏡檢;

7.油鏡鏡檢。菌體呈紫色者為革蘭氏陽性菌;呈紅色者為革蘭氏陰性菌。

注意事項:

1.培養物要新鮮,以免對結果的判斷造成影響;

2.酒精洗脫為關鍵步驟,不可長時間洗脫,以免對結果判斷造成影響;

3.碘液容易揮發,平時應擰緊瓶蓋、避光保存;

4.涂片可采用自然風干、干燥箱等方法進行干燥;

5.每一步水洗時,注意不要直接對著涂片沖洗,水流應從上方流經涂片,輕輕水洗。